樣品前處理：

基質：奶粉

稱取試樣 2.5g( 精確到 0.01g) 置于 50mL 離心管中，加入 VB12 標準品混勻，將 20mL 已預熱到 60℃的水加入到樣品中使其溶解，溶解后冷卻至室溫，用水定容至 25mL，搖勻，4000 rpm 離心 15min，準確吸取下層液20mL 于干凈容器中，備用。

小柱操作：

維生素 B12 免疫親和柱，SBBB-CC55002，3mL/25pcs

上樣：上述溶液以約 1-2 滴 /s 的流速緩慢通過親和柱

淋洗：上樣液下降至柱體時（未完_全流干），用 10mL 水淋洗，棄去全部流出液，并使 2-3mL 空氣通過柱體

洗脫：1mL 甲醇，控制流速約為 1 滴 /s, 收集全部洗脫溶液于玻璃試管，加入 1mL 水混勻供 HPLC 分析。

樣品前處理：

基質：液態(tài)奶、奶粉

稱取 5 g 樣品，用 pH 7.0 PBS 溶液定容至 50 mL，混勻，超聲 10 min。

① 于 10000 r/min 離心 15 min，吸取 20 mL 中間層試液于另一 50 mL 離心管中，作為上樣液。

② 或將提取樣本用纖維濾紙（SCEQ-GF07110）過濾，準確吸取濾液 20 mL 于另一 50 mL 離心管 中，作為上樣液。

小柱操作：

SBBB-CC55004，Protein G 免疫球蛋白親和柱（HP 柱）,1 mL；

活化 ：10 mL pH 7.0 PBS 溶液活化親和柱，調節(jié)壓力使其流速約 2 mL/min（1 滴 /s）通過親和柱，直至液面下降到親和柱管體（未完_全流干）；

上樣 ：將上述前處理后的 20mL 上樣液，在重力或負壓作用下，緩慢通過免疫親和柱，流速大約 1滴 /2s，直至樣品全部通過親和柱；

淋洗 ：用10 mL pH 7.0 PBS 溶液洗滌親和柱上多余的雜質，適當給一些壓力，控制流速以 2-3 mL/min（1~2 滴 /s），直至樣品全部通過親和柱，并排干淋洗液；

洗脫 ：用 5 mL 洗脫液（pH 2.5 甘氨酸溶液）洗脫親和柱，在重力作用下或負壓作用下，緩慢通過免疫親和柱，控制流速以 1 mL/min（1~2 滴 /2 秒），直至樣品全部通過親和柱，并排干洗脫液，收集全部 5 mL 洗脫液，注入 HPLC 檢測。